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电泳常见问题及处理方法(电泳处理是什么)

摘要 大家好,飞飞今天来为大家解答以下的问题,关于电泳常见问题及处理方法,电泳处理是什么这个很多人还不知道,那么下面让我带着大家一起来看看...

大家好,飞飞今天来为大家解答以下的问题,关于电泳常见问题及处理方法,电泳处理是什么这个很多人还不知道,那么下面让我带着大家一起来看看吧!

1、电泳的基本原理 电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。

2、许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。

3、电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。

4、电泳过程必须在一种支持介质中进行。

5、Tiselius等在1937年进行的自由界面电泳没有固定支持介质,所以扩散和对流都比较强,影响分离效果。

6、于是出现了固定支持介质的电泳,样品在固定的介质中进行电泳过程,减少了扩散和对流等干扰作用。

7、最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜,目前这些介质在实验室已经应用得较少。

8、在很长一段时间里,小分子物质如氨基酸、多肽、糖等通常用滤纸或纤维素、硅胶薄层平板为介质的电泳进行分离、分析,但目前则一般使用更灵敏的技术如HPLC等来进行分析。

9、这些介质适合于分离小分子物质,操作简单、方便。

10、但对于复杂的生物大分子则分离效果较差。

11、凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳技术的发展,使电泳技术成为分析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手段之一。

12、最初使用的凝胶是淀粉凝胶,但目前使用得最多的是琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。

13、蛋白质电泳主要使用聚丙烯酰胺凝胶。

14、电泳装置主要包括两个部分:电源和电泳槽。

15、电源提供直流电,在电泳槽中产生电场,驱动带电分子的迁移。

16、电泳槽可以分为水平式和垂直式两类。

17、垂直板式电泳是较为常见的一种,常用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质的分离。

18、电泳槽中间是夹在一起的两块玻璃板,玻璃板两边由塑料条隔开,在玻璃平板中间制备电泳凝胶,凝胶的大小通常是12cm ´ 14 cm,厚度为1mm~2 mm,近年来新研制的电泳槽,胶面更小、更薄,以节省试剂和缩短电泳时间。

19、制胶时在凝胶溶液中放一个塑料梳子,在胶聚合后移去,形成上样品的凹槽。

20、水平式电泳,凝胶铺在水平的玻璃或塑料板上,用一薄层湿滤纸连接凝胶和电泳缓冲液,或将凝胶直接浸入缓冲液中。

21、由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变,进而影响其电泳迁移的速度,所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行的,缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。

本文分享完毕,希望对大家有所帮助哦。

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